코로나바이러스감염증-19 대응 실험실

생물안전 가이드

<생물안전평가과 2020.2.18.>

◈ 현재, 코로나바이러스감염증-19의 원인 바이러스인 SARS-CoV-2의 병원성 잠재력 및 전파 역학에 대해 명확하게 밝혀진 바가 없으므로 모든 검체는 잠재적 감염원으로 고려하고 감염성물질 취급 시 노출 위험을 최소화하도록 주의하시기 바랍니다.

1. 생물안전 일반 기준

- 검체 등 감염성물질 취급 시 호흡보호구(N95, KF94 또는 동급 이상의 호흡보호구(PAPR 등)), 전신보호복, 일회용 장갑 등 개인보호구 착용

* 필요시 눈 보호구(고글 또는 안면보호구) 착용

* 불활화 후에는 일회용 가운 착용 가능

- 에어로졸 발생 가능성이 있는 작업은 생물안전작업대(BSC, ClassⅡ이상) 내에서 수행

* 피펫 작업 시 필터가 장착된 팁(filtered tip) 사용

- 원심분리를 위해 bucket 및 rotor에 원심관을 넣거나 빼내는 작업 시에는 물리적 밀폐장비인 safety bucket 및 sealed rotor 등 사용

- 검체 취급 후 오염된 실험대 및 작업대는 적절한 소독제를 사용하여 소독

- 폐기물은 고압증기멸균 등의 처리 후 의료폐기물로 처리

2. 작업별 생물안전 세부 기준

○ 감염성물질을 취급하는 아래의 작업은

생물안전 2등급(Biosafety Level 2, BL2) 수준의 실험실 내 ClassⅡ BSC 내에서 수행

- 검체의 1차 용기 포장(용기 내 주입, 밀봉, 소독) 및 개봉

- 불활화되지 않은 검체를 희석 및 분주하는 작업

- 검체 불활화(핵산 추출용 용해액 또는 불활화제 첨가) 작업

* 불활화된 검체는 생물안전작업대 외부에서 취급 가능

- 바이러스(in vivo 또는 in vitro) 증식을 수반하지 않는 진단·검사 시험

- 감염가능성이 있는 검체로부터 핵산 추출

- 현미경 분석을 위한 화학물질 또는 열 고정 작업 및 준비

- 원심분리를 위해 bucket 및 rotor에 원심관을 넣거나 빼내는 작업

* 원심분리기 사용 시 물리적 밀폐장비인 safety bucket 및 sealed rotor 등 사용

- 불활화되지 않았거나 고정되지 않은 감염된 조직 검체 취급

* 바이러스 농도가 높으므로 BL3 수준의 개인보호구 착용

- 진료 목적 검사, 혈액학적 검사 등의 임상검사 시험

○ 불활화된 검체를 취급하는 아래의 작업은

생물안전 2등급(Biosafety Level 2, BL2) 수준의 실험실에서 수행

- 불활화된 검체를 이용한 분자생물학적, 혈청학적 시험, 생화학적 분석, 항원 검출 시험

- 화학물질 또는 열 고정된 검체의 전자현미경 분석

- 추가 실험이 필요한 이송용 검체의 포장(1차 포장 및 1차 포장용기 소독 완료된 검체 대상)

○ 바이러스 배양 등 병원체를 직접 취급하는 아래의 작업은

생물안전 3등급(Biosafety Level 3, BL3) 실험실에서 수행

- 바이러스 접종, 배양, 분리, 역가 측정, 단백질 정제, 동결건조, 유전자재조합실험 등 살아있는 바이러스를 직접 취급하는 실험

- 바이러스 배양액 또는 바이러스가 감염된 세포(또는 세포 추출물)의 불활화 작업

* 생화화적 분석, 혈청학적 시험, 면역학적 시험 등을 위해 배양된 바이러스의 불활화 작업

(주요 유의사항)

- 눈 보호구 및 N95, KF94 동급 이상의 호흡보호구(PAPR 등) 사용 권고

* 마스크를 사용하는 경우 반드시 밀착 여부 확인

- 취급자는 병원체의 특성 등을 포함한 기관 생물안전지침 숙지 및 준수

- 취급자에 대한 상시 건강 모니터링 및 비상시 사고대응절차 마련

- 감염동물 실험 시 PAPR 또는 동급 이상의 호흡보호구 반드시 착용

- 실험에 사용된 물품은 멸균 등 정해진 절차에 따라 즉시 처리

○ 실험대 및 장비의 소독 작업

- 70% ethanol, 0.5% hydrogen peroxide, 또는 0.1% sodium hypochlorite(염소농도 0.1%, 1,000ppm) 1분간 반응 처리 및 그 외 일반적인 바이러스 살균제 등 적절한 소독제를 이용(참고자료 1. 3 참조)

* 환경부에서 허가된 방역용 살균 소독제를 사용할 수 있으며, 제조사에서 제시한 소독제의 희석 배율, 접촉 시간 및 취급 주의사항 등의 권장 사항을 따름

- 감염성물질을 취급한 모든 폐기물은 고압증기멸균 등의 처리 후 폐기물관리법에 따라 의료폐기물로 처리

3. 검체 및 병원체의 포장 및 수송

○ 검체 포장 방법

- 환자 및 의심환자 검체는 카테고리 B 감염성물질 포장기준(UN 포장기준 P650)에 따라 3중 안전포장

- 환자로부터 채취된 검체가 포함된 1차 용기를 소독처리(70% ethanol 등)한 후 라벨 작성

* 병원명, 검체 종류, 채취일, 환자명, 성별, 나이 등의 정보 표기

- 소독 처리된 1차 용기를 흡수제(종이타올 등)로 감싼 후 2차 용기에 넣음

* 2차 용기 내 여러 개의 1차 용기를 포장하는 경우, 전체 검체의 양을 흡수할 수 있는 충분한 양의 흡수제를 넣고 수송 중 임의의 충격에 1차 용기들이 서로 부딪혀 깨지거나 파손되지 않도록 충격완화제를 넣어 흔들리지 않도록 고정함

- 2차 용기의 뚜껑을 단단히 잠금 후 3차 용기에 넣음

- 검체 의뢰서를 3차 용기 뚜껑 사이에 넣은 후 포장

- 3차 수송용기 겉면에 보내는 사람, 받는 사람, 응급상황 시 연락처 및 카테고리 B 감염성물질을 나타내는 UN 3373 표식

- 수송용기 재사용 시 소독방법

⋅2차 용기 소독방법: 70% ethanol 또는 Sodium hypochlorite(염소농도 0.1% 또는 1,000ppm)로 균일하게 분무 또는 침지 후 1분간 반응 처리

* 염소는 피부 등 인체 독성이 강하므로 장갑 착용 및 환기 등 작업 시 유의

⋅3차용기의 경우, 용기 외부에 기록된 이전 개인정보를 삭제 후 재사용

○ 병원체 포장 방법

- 바이러스 배양액은 카테고리 A 감염성물질 포장기준(UN 포장기준 P620)에 따라 3중 안전포장

* 포장 방법은 감염성물질 안전수송지침(2019, 질병관리본부) 내 카테고리 A 포장 방법(p17) 준수

- 3차 수송용기 겉면에 보내는 사람, 받는 사람, 응급상황 시 연락처를 반드시 표기 및 UN2814 표식

○ 수송 시 유의사항

- 신종 코로나바이러스 감염증 의심검체 및 병원체 수송 담당자 지정

* 수송담당자는 비상연락망을 유지하고 비상조치 등에 대한 사항을 숙지해야 하며 인수인계절차를 수행

- 감염성물질 안전수송지침(2019, 질병관리본부) 준수

4. 기타 사항

○ 환자로부터의 검체 채취 방법, 검체 운송 중 보관 조건 등은 ‘신종 코로나바이러스 확인을 위한 검체 채취 안내서’를 따름

○ 바이러스 배양 및 취급에 대한 기타 세부 사항은 SARS-CoV 및 MERS-CoV 취급 기준을 따름

5. 관련 문의

○ 질병관리본부 생물안전평가과(043-719-8041, 8044, 8057)

<참고자료>

1. Laboratory biosafety guidance related to the novel coronavirus (2019-nCoV) Interim guidance. February 12, 2020. WHO

https://www.who.int/docs/default-source/coronaviruse/laboratory-biosafety-novel-coronavirus-version-1-1.pdf?sfvrsn=912a9847_2

2. Interim Laboratory Biosafety Guidelines for Handling and Processing Specimens Associated with Coronavirus Disease 2019 (COVID-19) February 10, 2020. CDC, US

https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-nCoV/lab/lab-biosafety-guidelines.html

3. Persistence of coronaviruses on inanimate surfaces and its inactivation with biocidal agents. Günter Kampf, Daniel Todt, Stephanie Pfaender, Eike Steinmann, Journal of Hospital Infection, Available online February 6, 2020.

https://doi.org/10.1016/j.jhin.2020.01.022

4. Inactivation of surrogate coronaviruses on hard surfaces by health care germicides. R.L. Hulkower, L.M. Casanova, W.A. Rutala, D.J. Weber, M.D. Sobsey, Am J Infect Control, 39 (2011), pp. 401-407

5. Chemical disinfection of non-porous inanimate surfaces experimentally contaminated with four human pathogenic viruses. S.A. Sattar, V.S. Springthorpe, Y. Karim, P. Loro, Epidemiology and Infection, 102 (1989), pp. 493-505

6. 감염성물질 안전수송지침(2019, 질병관리본부)